不同冷冻保存方法对男性DNA完整性和精子染色质质量的影响

冷冻保存的人类精子用于辅助生殖技术。然而，冷冻保存对精子 DNA 完整性的影响尚不清楚。

目的： 本研究的目的是：(i) 确定精液冷冻保存对人类精子 DNA 完整性和染色质结构的影响；(ii) 测试从 TUNEL 和 SCSA® 获得的参数是否相关；(iii) 验证精子活力、形态和活力与 TUNEL 和 SCSA® 参数之间的相关性。

材料和方法： 招募在生育诊所就诊的男性，并根据其精子参数进行分组（n = 9/组）：正常精子症、少弱精子症和畸形精子症。每个精液样本均按如下方式处理：（i）直接冷冻于-80°C；(ii) 在精子维持培养基中稀释，在4℃下冷却30分钟并在-80℃下冷冻；(iii) 在精子维持培养基中稀释；或 (iv) 在 SpermFreeze 中。然后将来自方法(iii)和(iv)的每种混合物在液氮蒸气中悬浮30分钟并投入液氮中。储存至少两个月后，样品在室温下解冻，并进行运动性和活力、TUNEL 和 SCSA® 检测分析。

结果： 冻融后运动力和活力逐渐下降。冻融后，所有样品的 TUNEL 评分均显着增加，而 SCSA® 的 DNA 碎片指数 (DFI) 未观察到显着变化。在正常精子样本中未观察到高 DNA 染色率 (HDS) 百分比的变化；然而，在少弱精子症的所有方法中以及在畸形精子症样品的方法(ii)-(iv)中，其显着增加。DFI 和 TUNEL 评分彼此显着相关，并且与精子活力、活力和形态呈负相关。

讨论和结论： 冷冻保存似乎对人类精子 DNA 的完整性和致密性有害。然而，在所测试的各种储存方法下，精子 DFI 在冷冻保存过程中并未受到影响。临床医生和研究人员在使用冷冻精子进行辅助生殖时应考虑这些信息。